新型冠狀病毒核酸檢測，對于臨床早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早隔離、早治療至關(guān)重要，是有效防控新冠肺炎疫情的關(guān)鍵技術(shù)支撐。那么，核酸檢測的原理是什么？為什么有些病人沒有確診但會被幾次采樣檢測？我們普通人能否進行自測？針對這些問題，記者采訪了軍事醫(yī)學研究院副研究員康曉平。
問：病毒核酸檢測試劑盒的原理是什么？
答：由于核酸檢測技術(shù)成熟、易于實施，核酸檢測目前是病毒感染檢測的最主要方法。
病毒的特點就是形態(tài)非常小，在普通光學顯微鏡下看不到，肉眼更是無法直接觀察。但每種病毒都有其獨特的基因序列，通過檢測病人體內(nèi)的病毒核酸，就可判斷病人體內(nèi)是否存在病毒。
現(xiàn)在的病毒核酸檢測試劑盒，多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測原理就是以病毒獨特的基因序列為檢測靶標，通過PCR擴增，使我們選擇的這段靶標DNA序列指數(shù)級增加，每一個擴增出來的DNA序列，都可與我們預(yù)先加入的一段熒光標記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號，擴增出來的靶基因越多，累積的熒光信號就越強。而沒有病毒的樣本中，由于沒有靶基因擴增，因此就檢測不到熒光信號增強。所以，核酸檢測，其實就是通過檢測熒光信號的累積來確定樣本中是否有病毒核酸。
問：病毒核酸檢測試劑盒是怎樣研發(fā)出來的？
答：病毒核酸檢測試劑盒的一個優(yōu)勢就是研發(fā)過程很快，但前提是必須掌握一定量的病毒基因序列。一旦有了病毒基因序列，通過生物信息學分析，就可確定候選的核酸檢測靶標，并進行引物和探針的設(shè)計。核酸檢測試劑盒的組分中，檢測引物和探針最為關(guān)鍵。靈敏特異的擴增引物，對檢測結(jié)果的準確與否發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。所以，一般在研發(fā)階段都會設(shè)計多對引物探針，通過實驗篩選出擴增效果最好的引物探針，組裝在病毒核酸檢測試劑盒中。
問：病毒核酸試劑盒在使用中應(yīng)注意哪些問題？
答：為了應(yīng)對防控新冠肺炎疫情，國家藥監(jiān)局開通了綠色通道，診斷試劑的審批非?？?，但審批流程并沒簡化。每一種檢測試劑，都必須完成質(zhì)量檢驗和臨床樣本考核。用于考核的樣本，對數(shù)量、類型都有明確要求。只有通過3家以上獨立醫(yī)學機構(gòu)的臨床樣本考核，檢測準確性達到臨床要求，才有可能通過國家藥監(jiān)局的審批，獲得診斷試劑生產(chǎn)批號。
核酸檢測結(jié)果的準確與否，不僅與試劑盒自身的檢測準確性有關(guān)，也跟檢測樣本采集的時機和檢測樣本的類型密切相關(guān)。首先，采樣時機很重要，如果病人剛吃過飯、刷過牙，咽部的病毒被清洗掉了，這時候去采集，即使是病毒感染陽性病人，核酸檢測也容易出現(xiàn)陰性結(jié)果。所以，有經(jīng)驗的醫(yī)護人員，通常會要求病人在采集呼吸道樣本前別喝水、別吃飯。
檢測結(jié)果還跟待測樣本的類型有關(guān)。同一病人同一時間采集的不同樣本，檢測結(jié)果差別也會很大。從疫情出現(xiàn)至今，我直接參與檢測的臨床樣本有好幾千例，在目前檢測的新型冠狀病毒感染病人樣本中，通常肺部灌洗液和痰液中的病毒核酸量高于鼻、咽等呼吸道拭子,而呼吸道拭子中的病毒核酸量會遠遠高于血液。另外，隨著病程的不斷變化，病人體內(nèi)的病毒量也在動態(tài)變化。所以確實會有不同時間采樣檢測結(jié)果不同的情況。
問：為什么有些病人沒有確診但會被幾次采樣檢測？
答：在目前的新型冠狀病毒傳染病診療指南中，陽性病例的判定是雙靶標核酸檢測陽性，如果僅單靶標核酸檢測陽性，病人雖不能確定為感染陽性，但也不能排除被感染，所以臨床醫(yī)生會根據(jù)檢測結(jié)果并結(jié)合病程多次采樣檢測。有時，核酸陰性結(jié)果也不能排除被新型冠狀病毒感染，需要排除可能產(chǎn)生假陰性的因素，包括：樣本質(zhì)量差，樣本采集的時機不合適，沒有正確保存、運輸和處理樣本，病毒變異，等等。
問：普通人能自己使用試劑盒進行檢測嗎？
答：目前獲得生產(chǎn)批號的幾款新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒都需要專業(yè)的儀器設(shè)備，必須由專業(yè)人員在專業(yè)的實驗室內(nèi)進行操作，普通人在家里是無法使用的。核酸檢測要取得準確結(jié)果，規(guī)范操作很關(guān)鍵。通常試劑盒說明書會講解得很詳細，包括適用的儀器、試劑的存儲條件、試劑的配置等。專業(yè)人員按照說明書規(guī)范操作，檢測結(jié)果都是可信的。